Впч реал тайм что это

Human Papillomavirus 16 (HPV 16), ДНК [реал-тайм ПЦР]

Исследование для выявления онкогенного вируса папилломы человека (ВПЧ) 16 типа, в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) вируса в образце биоматериала.

Синонимы русские

Вирус папилломы человека, ВПЧ, 16 тип, папиллома-вирус.

Синонимы английские

HPV-16 [Real-Time Polymerase Chain Reaction, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR], OncogenicHPV, High-riskHPV, hrHPV.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки), мазок урогенитальный (с секретом предстательной железы), ректальный мазок, соскоб урогенитальный.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.
  • Женщинам исследование (процедуру взятия урогенитального мазка) рекомендуется производить до менструации или через 2 дня после её окончания.
  • Мужчинам — не мочиться в течение 3 часов до взятия урогенитального мазка.

Общая информация об исследовании

В большинстве случаев рак шейки матки обусловлен инфекцией вирусом папилломы человека (ВПЧ). На сегодняшний день известно около 150 разновидностей ВПЧ, обладающих разной способностью к персистенции в эпителии шейки матки и разной степенью онкогенного риска. 16 тип ВПЧ относится к группе так называемых ВПЧ высокого онкогенного риска. Показано, что 50 % случаев рака шейки матки вызваны 16 типом ВПЧ. Также 16 тип ВПЧ может быть выявлен в подавляющем большинстве случаев рака вульвы, влагалища, ануса и полового члена. На сегодняшний день исследование РТ-ПЦР на ВПЧ 16 типа включено в программу скрининга рака шейки матки и предраковых состояний и наблюдения женщин с этими заболеваниями.

РТ-ПЦР является методом молекулярной диагностики, позволяющим выявлять в биологическом материале (например, в урогенитальном мазке) фрагменты генетического материала ДНК ВПЧ, а также производить количественную оценку вирусной нагрузки (в крестах).

Исследование РТ-ПЦР на ВПЧ рекомендуется в следующих ситуациях:

1. При выявлении в цитологическом мазке атипичных клеток плоского эпителия неясного значения;

2. При дальнейшем наблюдении женщин с патологическими признаками в цитологическом мазке, но нормальными результатами кольпоскопии/биопсии;

3. При оценке эффективности лечения ЦИН 2+ (дисплазия средней степени);

4. При проведении скрининга рака шейки матки и предраковых состояний в группе женщин старше 30 лет в сочетании с цитологическим мазком. Следует отметить, что на данный момент использование РТ-ПЦР в комбинации с цитологическим мазком рекомендовано только в группе женщин старше 30 лет. Использование РТ-ПЦР в качестве скринингового теста (отдельно или в комбинации с цитологическим мазком) в группе женщин младше 30 лет не рекомендовано. Также скрининг рака шейки матки не проводится в группе женщин старше 65 лет.

Традиционно для скрининга рака шейки матки используется цитологический мазок по Папаниколау. С помощью этого теста можно выявить наличие атипичных клеток и заподозрить предраковые изменения эпителия шейки матки на ранних стадиях (цервикальную интраэпителиальную неоплазию, ЦИН). При сравнении результатов скрининга с помощью цитологического мазка и исследования РТ-ПЦР было показано, что метод РТ-ПЦР позволяет выявлять женщин с диспластическими изменениями эпителия на более ранних стадиях. Метод РТ-ПЦР обладает очень высокой чувствительностью, превосходящей чувствительность цитологического мазка. Высокая чувствительность теста означает, что отрицательный результат на ВПЧ 16 в сочетании с отрицательным результатом исследования на другие онкогенные ВПЧ практически позволяет исключить риск развития рака шейки матки. Благодаря этому при использовании метода РТ-ПЦР в программе скрининга рака шейки матки интервал между повторными скрининговыми анализами может быть увеличен до 5 лет (по сравнению с 3 годами при использовании только цитологического мазка).

Метод РТ-ПЦР характеризуется очень высокой специфичностью и способен выявлять конкретный тип вируса. Это чрезвычайно важно, учитывая абсолютно разные подходы к ведению женщин с ВПЧ высокого и низкого онкогенного риска. Так, положительный результат на ВПЧ 16 типа свидетельствует о наличии именно 16 типа ВПЧ и будет отрицательным при наличии неонкогенных типов ВПЧ (например, 6 или 8). С другой стороны, опять же благодаря высокой специфичности, исследование РТ-ПЦР на ВПЧ 16 типа не дает никакой информации о наличии других типов ВПЧ высокого онкогенного риска, например ВПЧ 18.

Следует отметить, что специфичность РТ-ПЦР в отношении вируса и в отношении рака шейки матки – это не одно и то же. Действительно, специфичность теста в отношении вируса очень высокая. Однако из-за того, что многие, даже выраженные диспластические изменения эпителия шейки матки, связанные с ВПЧ, спонтанно и бесследно регрессируют, специфичность РТ-ПЦР в отношении рака шейки матки не такая высокая. Поэтому однократный положительный результат анализа РТ-ПЦР на ВПЧ-16 не всегда говорит о наличии риска рака шейки матки и предраковых состояний. Это особенно касается молодых женщин. С другой стороны, сохранение положительного результата РТ-ПЦР при повторных анализах на протяжении более 2 лет свидетельствует о высоком риске развития ЦИН высокой степени в ближайшие 5-10 лет.

Метод РТ-ПЦР не предназначен для скрининга злокачественных или предраковых заболеваний, вызванных ВПЧ 16 типа, у мужчин.

Следует отметить, что кроме 16 типа существует еще около 15 других типов ВПЧ высокого онкогенного риска. По этой причине отрицательный анализ РТ-ПЦР на ВПЧ 16 типа не позволяет полностью исключить риск рака шейки матки и должен быть дополнен другими лабораторными тестами.

Для чего используется исследование?

  • Для скрининга рака шейки матки и предраковых состояний и наблюдения женщин с этими состояниями.

Когда назначается исследование?

  • При выявлении в цитологическом мазке атипичных клеток плоского эпителия неясного значения (ACS-US);
  • при дальнейшем наблюдении женщин с патологическими признаками в цитологическом мазке, но нормальными результатами кольпоскопии/биопсии;
  • при оценке эффективности лечения ЦИН 2+;
  • каждые 5 лет при проведении скрининга рака шейки матки и предраковых состояний в группе женщин 30-60 лет в сочетании с цитологическим мазком.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

  • ВПЧ 16 типа (ВПЧ высокого онкогенного риска).
  • норма;
  • прекращение инфекции;
  • неправильный сбор биоматериала для исследования.

Что может влиять на результат?

Наличие в образце биоматериала крови может препятствовать проведению реакции.

Важные замечания

  • Однократный положительный результат анализа РТ-ПЦР на ВПЧ-16 не означает наличие риска рака шейки матки и предраковых состояний;
  • отрицательный анализ РТ-ПЦР на ВПЧ 16 типа не позволяет полностью исключить риск рака шейки матки.

Также рекомендуется

19 Human Papillomavirus 31/33 (HPV 31/33), ДНК [ПЦР]

Кто назначает исследование?

Использованные источники: helix.ru

СТАТЬИ ПО ТЕМЕ:

  Надо ли лечить впч у мужчин

  Как подготовиться к мазку впч

  Впч 116

  Тип впч 31 что это

Human Papillomavirus, ДНК количественно [реал-тайм ПЦР]

Молекулярно-генетическое исследование, в ходе которого выявляется ДНК вируса папилломы человека и количественно определяется вирусная нагрузка в материале.

Определяется количество только ВПЧ высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы) – без указания типа.

Синонимы русские

Вирус папилломы человека (ВПЧ), папиллома-вирус человека.

Синонимы английские

Human Papillomavirus, DNA, Quantitative; HPV, Viral Load.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок урогенитальный (с секретом предстательной железы), ректальный мазок.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Женщинам рекомендуется сдавать урогенитальный мазок или мочу до менструации или через 2 дня после её окончания.
  • Мужчинам не следует мочиться в течение 3 часов до сдачи урогенитального мазка или мочи.

Общая информация об исследовании

Вирус папилломы человека – ДНК-содержащий вирус из семейства паповавирусов, ассоциированный с развитием кондилом, бородавок, предраковых изменений аногенитальной области, рака шейки матки. Существует более 100 типов ВПЧ, более 30 из них могут инфицировать половые пути, и около 14 генотипов связаны с развитием рака шейки матки, прямой кишки, полового члена и новообразований некоторых других локализаций (например, орофарингеальной карциномы).

Онкогенные папиллома-вирусы имеют в составе ДНК белки Е6/Е7, которые способны подавлять процессы апоптоза (запрограммированной гибели) в клетках с измененным генетическим материалом. Генотипы 1, 2, 3, 5 считаются неонкогенными, а генотипы 6, 11, 42, 43, 44 относятся к папиллома-вирусам низкого онкогенного риска. К ВПЧ высокого онкогенного риска относятся генотипы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 и 68.

Основной путь распространения инфекции – половой, включая орально-генитальные и анальные контакты, также возможна вертикальная (от матери ребенку) и контактно-бытовая передача инфекции. В организм человека может попасть несколько типов ВПЧ одновременно. Заражение обычно происходит после начала половой жизни в возрасте 16-25 лет. При инфицировании онкогенными генотипами вируса между 25 и 35 годами вероятны интраэпителиальные поражения и, как следствие, через несколько лет рак. В 70 % случаев в течение первого года и в 90 % случаев через 2 года после инфицирования возможно самоизлечение.

Рак шейки матки (РШМ) по распространенности занимает 3-е место среди всех злокачественных опухолей у женщин (после рака молочной железы и рака толстой кишки). Частота инвазивного рака шейки матки в мире составляет 15-25 на 100 000 женщин. Новообразования шейки матки возникают в основном у женщин среднего возраста (35-55 лет), редко диагностируются у женщин моложе 20 лет и в 20 % случаев выявляются в возрасте старше 65 лет. 5-летняя выживаемость при локализованном (местном, in situ) раке шейки матки равна 88 %, в то время как выживаемость при распространенном раке не превышает 13 %. Кроме инфицирования онкогенными генотипами ВПЧ, риск развития рака шейки матки повышают курение, хламидийная или герпетическая инфекция, хронические воспалительные гинекологические заболевания, длительное применение противозачаточных препаратов, множественные роды, случаи рака шейки матки в семье, раннее начало половой жизни, частая смена половых партнеров, недостаточное поступление с пищей витаминов А и С, иммунодефициты и ВИЧ-инфекция. Несмотря на то что вирус папилломы человека не всегда приводит к новообразованиям, более 93 % случаев рака шейки матки ассоциированы с ним.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с высокой чувствительностью и специфичностью выявляет ДНК вируса папилломы человека (ВПЧ) в более чем 90 % случаев рака и 75-85 % интраэпителиальной неоплазии с выраженной дисплазией. По данным исследований, количественное содержание вируса в материале коррелирует со степенью неоплазии: чем выше вирусная нагрузка, тем выраженнее цитологические изменения в эпителии. При обследовании необходимо учитывать генотип вируса, наличие и степень цитологических и гистологических изменений в тканях, увеличение или снижение вирусной нагрузки через несколько месяцев (6 месяцев и более) после предыдущего обследования.

Для чего используется исследование?

  • Чтобы оценить риск развития новообразований, ассоциированных с ВПЧ (рак шейки матки, рак прямой кишки, рак аногенитальной области и других локализаций).
  • Для контроля за эффективностью лечения предраковых заболеваний, ассоциированных с ВПЧ.
  • Для мониторинга папиллома-вирусной инфекции и прогнозирования её течения.

Когда назначается исследование?

  • При выявлении цитологических изменений в мазке на атипию, в мазке по Папаниколау, в гистологическом препарате.
  • При кондиломах и других морфологических изменениях половых путей.
  • При скрининге рака шейки матки у женщин старше 25-30 лет (в качестве дополнительного исследования).
  • При наблюдении за инфицированными ВПЧ.
  • При лечении рака и предраковых состояний, ассоциированных с ВПЧ.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Уровень вирусной нагрузки интерпретируется с учетом результатов цитологического исследования мазков, гистологических изменений в биоптате и генотипа вируса, изменении его количества с течением времени.

  • Количество ДНК ВПЧ не определяется при отсутствии вируса в исследуемом образце или его минимальном количестве (ниже детектируемого уровня) – риск развития патологического процесса, связанного с ВПЧ, минимальный.
  • Клинически малозначимая концентрация вируса (менее 10 3 копий ДНК ВПЧ на 10 5 клеток) – минимальный риск развития дисплазии, транзиторное течение вирусного процесса.
  • Клинически значимая концентрация вируса (более 10 3 копий ДНК ВПЧ на 10 5 клеток) – хроническая инфекция с высоким риском развития дисплазии и РШМ.
  • Более 10 5 копий ДНК ВПЧ на 10 5 клеток при установленном факте персистентного течения инфекции (ВПЧ выявляется более 1 года) – усиленная вирусная нагрузка, ассоциированная с повышенным риском тяжелой дисплазии, часто встречается при РШМ.
  • Снижение вирусной нагрузки в 10 раз за 6 месяцев – транзиторная инфекция.
  • Рост вирусной нагрузки через 6 и более месяцев после лечения указывает на возможность рецидива.

Что может влиять на результат?

Недостоверный результат может быть получен при:

  • неправильном взятии и хранении материала;
  • загрязнении исследуемого материала.

Важные замечания

  • Инфицирование ВПЧ не всегда приводит к раку шейки матки.
  • Возможно одновременное заражение несколькими генотипами ВПЧ.
  • Результат анализа должен интерпретироваться с учетом заключений цитологического и гистологического исследований.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Литература

  • Arbyn M. et al. (2010). «European Guidelines for Quality Assurance in Cervical Cancer Screening. Second Edition–Summary Document». Annals of Oncology 21 (3): 448–458.
  • Hsiu-Ting Tsai, Ching-Hu Wu, Hsiao-Ling Lai, et al. Association between Quantitative High-Risk Human Papillomavirus DNA Load and Cervical Intraepithelial Neoplasm Risk Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2005;14:2544-2549.
  • Saslow D, Solomon D, Lawson HW, et al. American Cancer Society, American Society for Colposcopy and Cervical Pathology, and American Society for Clinical Pathology Screening Guidelines for the Prevention and Early Detection of Cervical Cancer. Am J Clin Pathol. 2012;137:516-542.
  • «Genital HPV Infection – CDC Fact Sheet». Centers for Disease Control and Prevention (CDC). April 10, 2008. Retrieved 13 November 2009.
  • Материалы и рекомендации Противоракового Общества России. Режим доступа: /%d0%b0%d1%83%d1%82%d0%be%d1%81%d0%be%d0%bc%d1%8b
Подписка на новости

Оставьте ваш E-mail и получайте новости, а также эксклюзивные предложения от лаборатории KDLmed

Использованные источники: kdlmed.ru

ВАС МОЖЕТ ЗАИНТЕРЕСОВАТЬ:

  От впч может быть температура

  Впч качественный анализ

  Кто вылечил впч 39

ВПЧ – количественным методом Real Time ПЦР

Диагностическое направление

Общая характеристика

Метод ПЦР (полимеразная цепная реакция) Real-Time позволяет осуществлять количественную оценку содержания ДНК в исследуемом материале, что является наиболее актуальным для микроорганизмов, которые в норме могут присутствовать в небольших количествах и в некоторых случаях, их обнаружение, без количественной оценки, может не иметь диагностического значения.
Точное определение их количества в некоторых случаях позволяет избежать неверной постановки диагноза и неоправданного лечения.
Диагностика ВПЧ основывается на клинических проявлениях, но следует помнить, что появление кондилом вызывают типы низкого онкогенного риска и существуют типы высокого онкогенного риска (ВПЧ 16, 18, 31 и 45), которые увеличивают риск предраковых заболеваний и рака половых органов (рак шейки матки).
Количественная ПЦР определяет количество вируса на момент обследования и помогает врачу выбрать правильную тактику ведения пациентки.
Высокая вирусная нагрузка рассматривается как один из факторов, снижающих спонтанную элиминацию вируса и увеличивающих риск развития неоплазии, поэтому широкое распространение получили количественные тесты по определению клинически значимых типов ВПЧ.

Показания для назначения

1. В комплексе с цитологическим исследованием (PAP-тест) в целях диагностики предраковых и раковых изменений шейки матки.
2. Скрининговые обследования женщин старше 30 лет (при отрицательном результате повторяют с интервалом в 3 года).
3. Контроль эффективности проведенной терапии.

Маркер

Маркер наличия возбудителя ВПЧ в в исследуемом биоматериале.

Использованные источники: dila.ua

ПОХОЖИЕ СТАТЬИ:

  Лечиться ли впч 18

  Институт им габричевского впч

  Анализ впч 16-18

Современные подходы в терапии пациентов с папилломавирусной инфекцией гениталий

Перламутров Ю.Н., Чернова Н.И., МГМСУ

Введение

Вирус папилломы человека (ВПЧ) – чрезвычайно распространенная инфекция, преимущественно передаваемая половым путем. Эпидемиологические аспекты заболевания разноречивы. Частота папиломавирусной инфекции (ПВИ) в странах Европы по разным авторам колеблется от 6 до 47%, в Америке – от 1 до 90%, что определяется, безусловно, методами исследования и спецификой изучаемой популяции. В отечественной литературе имеются данные об изучении выявляемости ПВИ среди различных слоев населения, которые варьируют от 56% среди пациенток с патологией шейки до 95% среди больных инфекциями, предаваемыми половым путем. ВПЧ представляет собой одну из самых распространенных в мире групп вирусов, поражающих кожу и слизистые оболочки организма. Выявлено более 120 типов ВПЧ. Семейство состоит из вирусов «низкого онкогенного риска», связанных с доброкачественными новообразованиями, например бородавками и папилломами, и вирусов 16 и 18 «высокого онкогенного риска», вызывающих онкологические заболевания шейки матки в 80% случаев. Это второе по частоте злокачественное заболевание у женщин в возрасте до 45 лет после рака молочной железы. В Америке, была проведена оценка сокращения продолжительности жизни при раке шейки матки, примерно на 26,1 лет[23]. В ряде исследований выдвигалась гипотеза о том, что ВПЧ играет определенную роль в развитии других онкологических заболеваний, включая злокачественные новообразования в полости рта и заднем проходе. Реализации злокачественных заболеваний способствуют в первую очередь снижение иммунитета. Конечно, не у всех инфицированных ВПЧ развивается рак.

Доминирующим кофактором, способствующим развитию ВПЧ-инфекции, является сексуальная активность, которая сопряжена с инфицированием сексуальных партнеров в 60%. [8,9,12,15,17]. Кроме количества сексуальных партнеров, возможно влияние анальных актов, которые вызывают снижение местного иммунитета, а также ранний возраст полового дебюта до 16 лет.
Кроме поражения аногенитальной сферы у людей практикующих оральный секс возможны поражения в виде папилломатозов гортани, трахеи и бронхов [1,16, 17, 18]. При этом орально-генитальные контакты являются ведущим путем передачи вируса папилломы человека в полости рта [5,22,23]. Аспирация цервикального и вагинального отделяемого в родах, может приводить к развитию у новорожденных и детей младшего возраста, респираторных папилломатозов (с поражением гортани, трахеи и бронхов) [5,9]. Триггерными факторами для рецидивирования папилломавирусной инфекции кроме сексуального поведения могут быть: использование в практике половых отношений нетрадиционного секса, микротравмы, гормональные нарушения, проявляющиеся недостаточностью лютеиновой фазы, гипо- и авитаминозы, наличие герпес вирусной инфекции, кандидоза, бактериального вагиноза в анамнезе, курение, прием антибиотиков [7,8]. Последние факторы, (курение и микст-инфекция), также негативно влияют на результат терапии, сокращая межрецидивный период. Наряду с внешними факторами: курение или ИППП, влияющими на развитие ПВИ, большое значение имеют врожденные особенности организма, в первую очередь — его иммунной системы. Большое значение в противостоянии организма развитию ПВИ и связанных с ней патологических процессов в генитальном тракте придается иммунокомпетентным клеткам и гуморальным факторам, действующим как на системном, так и на локальном уровне. Одним из высокоэффективных неспецифических факторов противовирусной защиты организма является система интерферона.
В настоящее время к этиотропным препаратам против ВПЧ можно отнести отечественный противовирусный препарат растительного происхождения Панавир, который также оказывает иммуномодулирующее и регенерирующее действие и используется в комплексной терапии.
Согласно результатам исследований, Панавир оказывает цитопротективное действие, существенно снижает инфекционную активность вирусов, модулирует синтез интерферона и повышает жизнеспособность инфицированных клеток. После однократной внутривенной инъекции отмечалось повышение уровня интерферонов 2,7-3 раза. Комбинированное использование препарата и деструктивных методов лечения способствует удлинению межрецидивного периода, прекращению вирусовыделения, в том числе при выявлении нескольких серотипов, включая высоко онкогенные 16 и 18 тип, со слизистых оболочек мочеполовых органов и уменьшению количества местных деструктивных воздействий[12] .

Целью настоящего исследования явилось определение эффективности препарата Панавир в суппозиториях, в комплексной терапии пациентов с ПВИ.

Материалы и методы

Под наблюдением находилось 60 больных с рецидивирующей папилломавирусной инфекцией, в возрасте от 20 до 40 лет и давностью заболевания от 10 до 24 месяцев.У всех больных были исключены другие ИППП. ДНК ВПЧ диагностировали при помощи ПЦР с определением типов (с 6 по 70). Вирусную нагрузку определяли методом PCR real time .

Гамма-интерферон исследовали в крови, полученной из кубитальной вены.Осмотр кожи и слизистых гениталий проводили 1раз в 5 дней. Забор материала для лабораторных исследований проводился до и через месяц после окончания лечения.

Оценка объективных признаков ПВИ на коже и слизистых проводилась с учетом интенсивности проявлений вегетаций. До лечения отмечались множественные кондиломы с экзофитным ростом в области влагалища, нижней спайки, малых половых губ у женщин, на теле и на головке полового члена в ладьевидной ямке у мужчин.

Изучение эффективности, переносимости и безопасности препарата проводилось на основании исчезновения или уменьшения клинических проявлений, динамики показателей гамма-интерферона, наличия ДНК вируса после лечения при типировании методом ПЦР и длительности ремиссии.

Больные были разделены на 2 группы. В группе №1 30 больным назначили Панавир, после 3-й суппозитории использовали лазерную деструкцию. Панавир применялся по схеме: по одному суппозиторию вводился ректально на ночь. Процедура повторялась через день, 5 суппозиторий на курс. В группе №2 состоящей из 30 пациентов, терапия ПВИ проводилась при помощи лазерной деструкции.

Результаты

В результате исследовании соскобов из урогенитального тракта при помощи ПЦР и ПЦР real time у 60 пациентов ДНК ВПЧ в клинически значимом титре была идентифициро­вана у всех больных. Использовалась качественная методика, которая позволила выделить типы условно высокого (16,18,31,33,45), и низкого (6,11,42,43,44) онкогенного риска. У 51 больного об­наруживались высокоонкогенные типы ВПЧ, у 9 пациентов низкоонкогенные ти­пы, у 42 пациентов имелись сочетания разных типов ВПЧ.

При этом у 3 пациентов обнаружено 5 типов вирусов, у 24 больных 4 типа, у 15 пациентов 2 типа и у 18 исследуемых по 1 типу. Наиболее часто выделялись 16 тип в 49 случаях, 52 тип в 40, 33 тип в 28.

При оценке показателей гамма-интерферона до лечения выявлены нарушения у всех 60 больных с рецидивирующей папилломавирусной инфекцией.

Таблица №1. Показатели гамма-интерферона у пациентов с РПВИ

Использованные источники: pda.rlsnet.ru

ПОХОЖИЕ СТАТЬИ:

  Впч только у одного партнера

  Впч гибридного захвата что это

  Как сдают впч тест

  Левофлоксацин от впч

Сущность обследования ПЦР в реальном времени

Сегодня ДНК-анализы активно используются с целью диагностирования инфекций и могут выявить даже единичных возбудителей. Самый известный способ исследования ДНК — полимеразная цепная реакция. Сегодня в медицинской практике активно внедряется новый метод — ПЦР в реальном времени. Суть его заключается в наблюдении и численной оценке накапливания продуктов полимеразной цепной реакции при автоматической фиксации и расшифровке результатов.

Применение этого метода анализа исключает стадию электрофореза. Это дает возможность предотвратить ложноположительные результаты и существенно сократить время для получения результата. ПЦР в реальном времени дает возможность исследовать материал за 20-60 минут и обнаружить даже одну молекулу дезоксирибонуклеиновой кислоты в пробе.

Анализ ПРЦ: сущность обследования и его принципы

Полимеразный метод цепной реакции создал Кэри Мюллис в 1983 г. За свое изобретение, ставшее одним из самых выдающихся в конце 20 века в сфере молекулярной биологии, он удостоился Нобелевской премии по химии (1993).

Принцип анализа методом ПЦР real time базируется на выявлении в биоматериале малой части ДНК провокатора подозреваемой инфекции. Дезоксирибонуклеиновая кислота состоит из множества оснований, поэтому для распознавания заболевания хватит минимального фрагмента молекулы. В период проведения ПЦР-анализа выискивается такой элемент ДНК, который характерен только для конкретного возбудителя инфекции.

Полимеразная цепная реакция непосредственно применяется с целью, чтобы обнаруженный фрагмент расплодить. К концу исследования фрагментов должно накопиться не меньше 1012.

Преимущества ПЦР в реальном времени:

  • высокая достоверность анализа;
  • определение численности фрагментов ДНК в материале;
  • минимальный риск получения ошибочного результата при диагностике;
  • короткий срок осуществления ПЦР анализа;
  • возможность обнаружения нескольких возбудителей одновременно;
  • фиксация процедуры и результатов в электронном виде.

Инфекции, выявляемые с помощью ПЦР-диагностики

В реальном времени ПЦР используется в медицинской практике для определения вирусной, бактериальной нагрузки (количества агентов), для установления числа внутриклеточных возбудителей инфекций, для анализа результативности лечения, для выявления устойчивости к лекарственным препаратам.

Заболевания, которые можно выявить с помощью ПЦР:

  • ВИЧ-инфекция;
  • инфекции, которые передаются половым путем;
  • вирусные гепатиты;
  • папилломавирус человека;
  • мононуклеоз;
  • цитомегаловирусная инфекция;
  • герпес;
  • туберкулез;
  • клещевой энцефалит;
  • кандидоз;
  • хеликобактерная инфекция.

Материал для сдачи ПЦР-анализа

Противопоказаний для данного исследования нет — все могут проводить ПЦР. Для изучения берут биоматериал человека:

  • соскоб клеток эпителия (из уретры у мужчин, из половых путей у женщин);
  • кровь и ее компоненты;
  • жидкости (плевры, суставов и др.);
  • слизь;
  • слюна;
  • моча;
  • мазок спермы у мужчин.

Материал помещают в амплификатор — прибор для ПЦР реал тайм.

Подготовка к ПЦР-анализу

Точность результатов, которые дает ПЦР диагностика, в большей степени зависит от соблюдения человеком рекомендаций по подготовке к анализу. Перед исследованием нужно придерживаться таких рекомендаций:

  1. За 10 дней до проб нужно прервать прием антибактериальных препаратов и терапевтические процедуры (если это не противоречит рекомендациям врача). Мужчинам не желательно мочиться за 4-5 часов до осуществления процедуры ПЦР в реальном виде.
  2. Полимеразная цепная реакция у женщин проводится до месячных или спустя 1-4 дня после их окончания.
  3. Перед забором крови нельзя есть и пить.
  4. Моча собирается утром в стерильную емкость.

Непосредственно перед сдачей анализа:

  1. Не проводить туалет половых органов с помощью антибактериальных средств.
  2. Не мочиться минимум за 3 часа до ПЦР анализа.
  3. Исключить спринцевание женщинам, не применять вагинальные свечи.
  4. Положительный исход диагностики зависит также от чистоты материала — очень важно исключить его контаминацию, которая ставит под сомнение достоверность результата.
  5. Рекомендуется приходить на обследование в период обострения заболевания. Если был незащищенный половой акт, должно пройти минимум 3 недели, прежде чем может проводиться диагностика.

Как берут анализ ПЦР real time?

Существуют определенные стандартные правила сбора биологического материала. Образцы материала берут в процедурном кабинете с помощью специального стерильного одноразового инструмента. После этого образцы помещаются в стерильные пробирки, которые перед этим обрабатываются хромовой смесью и подвергаются воздействию высокой температуры.

Венозная кровь собирается на голодный желудок. Перед исследованием необходимо исключить употребление жирной и аллергенной пищи. Для сбора мочи необходимо помыть половые органы чистой водой, собрать мочу в стерильную емкость и отнести в лабораторию. Если берется мазок из влагалища, врач использует специальный инструмент, когда пациентка располагается на гинекологическом кресле. Соскоб у мужчин берут из внешней части уретры. Когда материал взят, пробу направляют на исследование.

Расшифровка результатов ПЦР

Итоговый результат будет готов через сутки после сбора биоматериала. Иногда полимеразная цепная реакция может дать результат через час. Если в исходном материале не выявлено следов молекул возбудителей инфекций, то считается, что анализ ПЦР отрицательный.

Если выявлены следы инфекции в диагностируемом биоматериале, то результат положительный. Он свидетельствует о присутствии возбудителя в момент времени, когда сдавалась проба. Бывает, что полимеразная цепная реакция дает положительный результат, но нет видимых симптомов заболевания, то есть человек является носителем инфекции без демонстрации клинических признаков. В этом случае лечение не требуется, но необходимо постоянное наблюдение специалиста.

Инфекция от носителя может передаваться здоровому человеку. Также болезнь может переходить в хроническую форму. Если анализ дает положительный результат в крови, то это подтверждает факт, что человек уже не является носителем, и требуется лечение. Для каждого конкретного носителя инфекции количественный результат ПЦР может оценить врач индивидуально.

Расшифровка анализа дает возможность определить меру активности заболевания и его стадию. Этот фактор влияет на дозу назначенных препаратов, на курс лечения.

Полимеразная цепная реакция в реальном времени практически не дает ложноположительного результата, когда при отсутствии инфекции диагностика дает положительную пробу. Ложный результат ПЦР отрицательный прослеживается редко. Обычно это связано с тем, что в данный момент отсутствует активность инфекции.

На сегодняшний день полимеразная цепная реакция в реальном времени — одно из самых безошибочных исследований. Но при подозрении на любое заболевание не обязательно прибегать только к этому виду исследования. Есть определенная группа инфекций, для которых предпочтительны другие методы. Для каждого конкретного случая следует проконсультироваться со специалистом.

Использованные источники: 101analiz.ru

Related Post